当前位置:必一运动·(b-sports)官方网站 > 技术文章 > 1升污水仅需10分钟!empore™膜式固相萃取在“污水验毒”中的应用
摘要
对比传统填料固相萃取柱同cds公司emporetm膜式固相萃取柱(mpc)和ezdisk 滤器式固相萃取盘(mpc),应用于从污水中提取10种毒品及其代谢物。发现相较传统填料固相萃取柱,emporetm膜式固相萃取产品所需洗脱体积更少,适用流速范围更宽,提取效率更高。
前言
毒品问题一直是社会高度关注的焦点,污水中毒品及其代谢物的检测不仅能够反映当地的毒品滥用情况,更能反映某个特定区域禁毒工作效果,警方通过对污水中毒品检测数据的客观分析,构建毒情形势监测体系,有利于把控毒品发展态势,全面科学分析毒品滥用情况、确定毒情泛滥区域,进而强有力地推进毒毒工作[1]。
美国cds公司emporetm系列膜式固相萃取产品,具有上样速度快、重现性高、填料流失量低、洗脱体积少等特点。
通过实验对比了传统填料固相萃取柱同cds公司emporetm膜式固相萃取柱(mpc,7mm/3ml)和ezdisk 滤器式固相萃取盘(mpc,13mm)应用于污水样品中毒品及其代谢物的提取并用lc-ms/ms分析[2,3,4]。
1. 实验过程
1.1 仪器与试剂
1.1.1 spe1000全自动固相萃取系统(莱伯泰科);
1.1.2 extrapid固相萃取装置(北京莱伯帕兹检测科技有限公司);
1.1.3 m64高通量平行浓缩仪(莱伯泰科);
1.1.4 sciex exion lc™液相系统 triple quad™4500质谱系统(sciex);
1.1.5 甲醇(色谱纯,fischer );
1.1.6 乙腈(色谱纯,fischer );
1.1.7 甲酸;
1.1.8 浓氨水;
1.1.9 浓盐酸;
1.1.10 酸化水:用浓盐酸调节ph=2的水;
1.1.11 5%氨水甲醇溶液:量取氨水5ml,加甲醇稀释至100ml,混匀;
1.1.12 玻璃纤维滤膜:1.2μm;
1.1.13 200μl内衬管;
1.1.14 微孔滤膜 0.22μm,ptfe ;
1.1.15传统散装填料固相萃取柱(mcx, 60mg/3ml,北京莱伯帕兹检测科技有限公司);
1.1.15 emporetm膜式固相萃取柱(mpc,7mm/3ml,98-0604-0181-7 ea, 美国cds analytical);
1.1.16 ezdisk 滤器式固相萃取盘(mpc,13mm,98-0706-0120-1 ea, 北京莱伯帕兹检测科技有限公司)。
1.2 工作液配置
1.2.1 10种毒品混标标准溶液(甲基苯丙胺、苯丙胺、吗啡、o6-单乙酰吗啡、可卡因、苯甲酰安康宁、氯胺酮、去甲氯胺酮、mdma、mda, 均为1000ng/ml,溶剂为甲醇,购自坛墨质检标准物质中心)
1.2.2 10种毒品混标标准工作溶液:25ng/ml,移取0.5ml 10种毒品混标标准溶液置于20ml容量瓶中,用0.1%甲酸水定容。
1.2.3 10种毒品内标标准溶液:(甲基苯丙胺-d5、苯丙胺-d5、吗啡-d3、o6-单乙酰吗啡-d3、可卡因-d3、苯甲酰安康宁-d3、氯胺酮-d4、去甲氯胺酮-d4、mdma-d5、mda-d5, 均为1000ng/ml,溶剂为甲醇,购自坛墨质检标准物质中心)
1.2.4 10种毒品内标标准工作溶液:25ng/ml,移取0.25ml毒品内标标准溶液置10ml容量瓶,用甲醇定容。
1.3 实验部分
1.3.1 样品制备
将污水检材样品解冻并充分摇匀,以浓盐酸调节ph值小于2,使用溶剂过滤器和玻璃纤维滤膜过滤,取滤液待分析用。在固相萃取之前,取50ml已过滤样品加入100μl 10种毒品内标标准工作溶液(25ng/ml)混匀待净化。
1.3.2 净化与浓缩
emporetm膜式固相萃取柱、ezdisk 滤器式固相萃取盘及传统散装填料固相萃取柱(mcx, 60mg/3ml,)依次以4ml甲醇、4ml酸性水进行活化,之后以2ml/min上样,上样结束后用4ml水、4ml甲醇淋洗萃取柱,在690mmhg真空状态下干燥5min,最后用2ml 5%氨水甲醇溶液进行洗脱(传统散装填料固相萃取柱(mcx 60mg/3ml)用5ml 5%氨水甲醇溶液进行洗脱)。使用同一批次小柱,分别在流速5ml/min、10ml/min下,进行对比实验。
洗脱液经50℃氮吹至干,然后加入0.1%甲酸水溶液250μl复溶,混匀后用微孔滤膜过滤,装于200μl内衬管中,供仪器检测。
1.3.3 标准曲线配置
取与检材样品等量的纯净水,添加适量的10种毒品混标标准工作溶液,分别配制目标物的浓度为1ng/l、5ng/l、10ng/l、50ng/l、100ng/l、500ng/l溶液,与检材样品平行,经1.3.1、1.3.2的方法进行处理,供仪器检测
1.3.4 lc-ms/ms分析
色谱柱:shim-pack velox c18(2.7μm,2.1*100mm);
柱温:40℃;
流动相:a: 0.1%甲酸水溶液;b:乙腈;
流速:0.3 ml/ min;
进样量:5μl;
表1 梯度洗脱程序
离子源:esi源,正离子模式;
离子源参数:
is电压:5500v ;气帘气cur:35psi;
雾化气gs1:55 psi ;辅助气gs2:60psi;
源温度tem:600 ℃。
2. 实验结果
图1 标准样品图谱
图2 加标样品谱图
3. 结果与讨论
在本次实验中,膜式固相萃取柱和滤器式固相萃取盘的10种毒品及其代谢物的平均加标回收率为88.4%~112.5%,相对标准偏差rsd为0.9%-8.7%(表2),取得满意效果,传统式固相萃取柱的平均加标回收率为84.6%~131.3%,相对标准偏差rsd为1.6%-10.8%,除mda回收率偏大外,其他物质均满足要求。但在同样实验条件下,膜式固相萃取产品可使用更小洗脱体积(2ml),有效缩短了浓缩时间。且在上样速度为10ml/min时,六次平行实验rsd仍小于10.0%。
表 2 加标回收率和精密度汇总表
图3 样品洗脱体积对比表
4. 参考文献
[1] detection and quantification of ketamine hcl in alcohol/water matrices using esi-msn and lc-esi-ms, justin lygrisse, martin lapp, kelsey witherspoon and michael van stipdonk, proceedings of the 5th annual grasp symposium, wichita state university, 2009
[2] 向平, 施妍, 沈保华,等. 一种同时测定生活污水中11种毒品及其代谢物的分析方法:, cn111426768a[p]. 2020.
[3] xylazine, ketamine and their combination for lumbar epidural analgesia in water buffalo calves (bubalus bubalis),p. singh, k. pratap, amarpal, p. kinjavdekar et al. j. vet. med. a 53, 423–431 (2006)
[4] 污水中新精神活性物质的分析方法优化及验证, 陈培培, 杜鹏, 周子雷. 环境科学, 2018, 39(8): 3736-3743.